Figure 1. CellTox™ Green Dye binds DNA of cells with impaired membrane integrity. Viable Cell Low Fluorescence Nonviable Cell High Fluorescence Le multiplexage permet d’étudier plusieurs paramètres sur un même échantillon. L’avantage principal du multiplexage est une meilleure compréhension d’un évènement qui est mesuré dans les mêmes conditions qu’un autre paramètre, minimisant ainsi les erreurs d’interprétation ou les ambiguïtés sur des résultats obtenus indépendamment. Le multiplexage permet de s’assurer que les variables d’un échantillon sont les mêmes pour tous les paramètres et que d’autres variables ne sont pas introduites par les réplicats d’échantillons. En outre, le multiplexage permet de normaliser les résultats selon un paramètre donné, par exemple en déterminant le rapport entre une activité et le nombre de cellules viables dans le puits. Pour multiplexer 2 tests voir plus, il faut suivre certains critères : les signaux de chaque essai doivent avoir des spectres distincts et ne doivent pas avoir lieu en même temps, les réactions chimiques doivent être compatibles et les essais doivent pouvoir s’effectuer dans un seul puits ou être facilement séparés (par ex. en pipetant le milieu dans une autre plaque pour effectuer d’autres expériences sur les cellules). Les propriétés de CellTox™ Green en font un kit idéal pour être multiplexé avec une grande variété d’autres kits pour l’analyse cellulaire. CellTiter-Fluor™ Cell Viability Assay A. CellTiter-Fluor™ Cell Viability Assay + CellTox™ Green Cytotoxicity Assay CellTox™ Green Cytotoxicity Assay 100 200 300 400 500 0 IC50 = 1.67–2.05 × 105 2.0 × 105 1.5 × 105 IC50 = 1.64–2.10 × 105 1.0 × 105 0.5 × 105 –6 Log10 –5 [terfenadine], M –4 0 B. 100 200 300 400 500 0 IC50 = 5.50–7.82 × 106 IC50 = 5.13–7.82 × 106 2.0 × 104 4.0 × 104 6.0 × 104 8.0 × 104 –6 Log10 –5 [ionomycin], M Figure 2. Multiplexing the celltiter-Fluor™ cell Viability assay with the celltox™ Green cytotoxicity assay. HEK 293 cells were treated for 6 hours with a serial dilution of terfenadine (Panel A) or ionomycin (Panel B) and tested for viability and cytotoxicity. CellTox™ Green Dye was incorporated into the medium (no-step method) for half of the samples (+ CellTox™ Green Cytotoxicity Assay). Right axis represents signal from CellTox™ Green Dye and left axis represent signal from CellTiter-Fluor™ Viability Assay, both in relative fluorescent units (RFU). Each point and standard deviation represents six replicates. IC50 Lire l’article complet sur notre site PubHub » En savoir plus enews | Juillet 2015 –4 0 values are listed for samples with and without CellTox™ Green Dye. Viability Fluorescence (RFU) Cytotoxicity Fluorescence (RFU) Viability Fluorescence (RFU) 10887MA Cytotoxicity Fluorescence (RFU) 11698MA Control Control Pagina 8
Pagina 10Interactieve online handleiding, deze uitgave of mailing is levensecht online geplaatst met Online Touch en bied het naar een online publicatie omzetten van web maandbladen.
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